DNA甲基化研究是表观遗传学的重要内容，真核生物中的甲基化仅发生于胞嘧啶，即在DNA甲基化转移酶的作用下使CpG二核苷酸5’-端的胞嘧啶转变为5’-甲基胞嘧啶。DNA甲基化通常抑制基因表达，去甲基化则诱导了基因的重新活化和表达。这种DNA修饰的方式在不改变基因序列前提下实现对基因表达的调控，在脊椎动物的胚胎发育过程中起着重要的调控作用，参与多种疾病包括各种肿瘤的发病机理，是目前表观遗传学研究的热点。
主要技术原理
用亚硫酸氢盐处理基因组DNA，则未发生甲基化的胞嘧啶被转化为尿嘧啶，而发生甲基化的胞嘧啶不变。根据某一待测位点或者调查的某一区域序列设计引物进行PCR扩增，通过PCR电泳、测序、荧光定量及质谱等方法对扩增产物进行检测，根据检测结果分析基因组甲基化的情况。
服务特点
精确度高，能明确目的片段中每一个CpG位点的甲基化状态
主要服务方案
1. 亚硫酸氢盐测序法（Bisulfite Sequencing PCR，BSP）
实验原理：
用亚硫酸氢盐处理基因组DNA，未发生甲基化的胞嘧啶被转化为尿嘧啶，而甲基化的胞嘧啶不变。针对要调查的区域设计BSP引物进行PCR扩增，对扩增产物进行测序就可以判断哪些CpG位点发生了甲基化。根据测序方式不同，又分为以下几种：
BSP直接测序法：对于BSP引物扩增产物直接进行测序；
BSP克隆测序法：将PCR产物克隆，之后提取质粒进行测序，此方法成功率高、检测方便，适合常规数量样本的特定靶标区域甲基化分析，是国际通用的甲基化分析金标准；
BSP高通量测序法：可以进行目标片段甲基化水平分析，也可进行全基因组甲基化水平分析。
技术特点
准确度高、能给甲基化位点精确定位、可重复性高
实验流程
BSP引物设计：针对感兴趣的基因区域进行BSP引物的设计（一般扩增产物不超过300bp）
亚硫酸氢盐处理基因组DNA：提取基因组DNA并进行亚硫酸氢盐的转化
PCR扩增目的片段：BSP引物扩增感兴趣的区域
克隆到载体：将PCR产物纯化后连接到T载体上
克隆测序：挑取阳性菌斑，提取质粒并测序
序列分析：对测序的结果进行比对和甲基化分析（一般10个克隆子）
2. 荧光定量法（Methylight）
此方法利用TaqMan 探针和PCR引物来区分甲基化和未甲基化的DNA。首先用亚硫酸氢盐处理DNA片段，针对甲基化和未甲基化序列各设计一个探针，用不同的荧光标记，随后开展实时定量PCR。如果探针与DNA杂交则释放出荧光信号，根据荧光信号的强度比值计算甲基化水平。
技术特点
检测通量高。早期由于没有其它高通量的检测方式，用荧光定量法针对较多的样品进行检测时，是一个比较好的检测方案。但是该方法问题比较多，待检测的区域只有一个甲基化位点时，探针的区分度不高。同时，为了达到比较好的区分效果，一般采用MGB探针，探针成本较高。如果只是检测少量样品，探针分摊成本很高。现在针对较多的样品待检测时，通常都会采用高通量测序法，快速、准确，成本可控。
客户提供
要调查的基因名称、种属
要调查的甲基化区域或位点
足量的科研样本，保证样本质量，提供清晰样品编号
送样要求
样品要求：细胞≥105个；组织≥100mg，黄豆大小；全血≥0.5ml；基因组DNA ≥5ug
所有样品建议干冰或冰袋运输，保证样品质量
检测周期
常规检测任务2－4周内完成，具体时间根据样本量和检测的基因数而定。
下单流程
直接订购：将需求内容给直接发送到support@generay.com.cn， 或致电021-67840418
网上订购：捷瑞网站首页→订单下载→下载甲基化服务订单→填写完整实验信息→发送至support@generay.com.cn
报告内容
提供完整实验报告、电泳图、测序结果、序列比对结果、甲基化点状图、柱状图以及初步分析数据等。