一. 试剂盒组成

Components	GK0121 50 Preps	GK0122 100 Preps
gDNA recovery Column	50	100
2-ml Collection Tube	50	100
ACL Solution^(d)	25ml	50ml
AB Solution	20ml	40ml
Ext Solution	20ml	40ml
Proteinase K^(a)	500µl	1ml
Wash Solution^(b)	12ml	24ml
Elution Buffer^(c)	10ml	20ml
Buffer CBS	15ml	30 ml
Protocol	1	1

不得将Proteinase K直接加入到ACL Solution中，以免酶失活。
首次使用前，必须在Wash Solution瓶中加入4倍体积的无水乙醇，充分混匀后使用。每次使用后将瓶盖盖紧，以保持Wash Solution中的乙醇含量。如果发现Wash Solution由于运输或保管不当造成容量严重不准，请用量筒定容后再加入4倍体积的无水乙醇。
Elution Buffer为2.5mmol/L Tris-HCl, pH8.5。TE(pH8.0)或者水（pH>7.0）均可以使用，但是DNA的洗脱效率通常要低20%左右。
ACL Solution低温时可能出现结晶，请于37℃温育溶解摇匀后使用，不会影响产率。
注：GK0221/GK0222不含Proteinase K，其余与GK0121/GK0122完全相同。

二. 制品说明

gDNA recovery Column的内装有一层惰性大分子材料，它可以选择性吸附核酸物质，但不吸附蛋白质、多糖和其它非核酸类物质。通过ACL Solution 裂解释放出基因组DNA，然后通过gDNA recovery Column来吸附基因组DNA，经简单的洗涤步骤除去非特异性结合的杂质，然后用Elution Buffer、TE或者水洗脱。

三．要用途

从各种动物组织、动物细胞以及啮齿类动物(如鼠等)尾巴等材料中小量提取基因组DNA。

四．主要特点

1. 适用范围广，适用于各种动物组织材料基因组DNA的抽提。

2. 无须酚和氯仿抽提，无须乙醇沉淀。

3. DNA纯度好，得率高，无蛋白质和RNA污染。

五. 操作步骤

样品预处理：

·动物组织：

切取5～20mg的动物组织材料，在液氮中将组织研磨成粉末，并转移至1.5ml的离心管中。
然后加入400µl ACL Solution和10µl的Proteinase K。如有凝结块，可以用枪头吹吸打碎。
震荡混匀1分钟，然后置于55℃放置20分钟～3小时，在此期间间或取出混匀，有助于充分裂解，裂解完全的样品应澄清透明。不同来源的组织，完全裂解时间可能差异较大。
取出样品，待降至室温时轻轻震荡混匀。

·啮齿类动物(如鼠等)尾巴：

从动物尾部末端切取0.5～1cm的组织材料，在液氮中将组织研磨成粉末，并转移置1.5ml的离心管中。
然后加入400 µl ACL Solution和10 µl的Proteinase K。
震荡混匀1分钟，然后置于55℃水浴1～3小时，在此期间可以适当取出混匀，有助于充分裂解。
取出样品，待降至室温时轻轻震荡混匀。

·培养成熟的动物细胞：

在500～1000 rpm下离心约3～5分钟，收集细胞( 约5X10⁶ )。
加入400µl ACL Solution和10 µl的ProteinaseK。
震荡混匀1分钟，然后置于55℃水浴10～20分钟，在此期间可以适当取出混匀，有助于充分裂解。
取出样品，待降至室温时轻轻震荡混匀。

DNA提取：

经过上面预处理的样品按照下面步骤提取基因组DNA。

柱平衡步骤：在gDNA recovery Column中加入200μl Buffer CBS ，12,000rpm离心1分钟，弃透过液，备用。

5. 在经过预处理好的样品中，依次加入300 µl Ext solution和300 µl ABsolution，用力摇匀，然后12,000rpm离心5分钟。溶液将分层，上层为蓝色的抽提层，下层为透明水相，两层溶液中间可能会有部分沉淀层，DNA在下层水相中。

注：如样品量较少或溶液澄清不粘稠，可不添加Ext Solution，只添加300µl AB Solution摇匀后离心。

6. 将枪头穿过上层溶液，深入到下层溶液，将下层溶液仔细吸出到gDNA recovery Column中，尽量避免吸到上层溶液及中间层的沉淀。

7. 8,000 rpm离心1分钟，取下gDNA recovery Column，倒掉收集管中废液。

8. 将gDNA recovery Column放回收集管中，加入500µl Wash Solution，8,000rpm，室温离心1分钟。

9. 重复步骤8一次。

10. 取下gDNA recovery Column，弃去收集管中的废液。将柱放回收集管中，12,000rpm，室温离心1分钟，以除去残留Wash Solution。

11. 将柱放入新的洁净1.5ml离心管中，在柱中央加入50～100 µl Elution Buffer，室温或55℃放置２分钟。然后12,000rpm，室温离心1分钟。离心管中的液体即为基因组DNA。根据用途，样品可于4℃或-20℃保存。

上海捷瑞生物